肽段覆盖率/肽谱图分析

蛋白样品鉴定过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切，鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息，百泰派克公司会选用在蛋白鉴定过程中常用的6种蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分别对靶蛋白进行酶切和鉴定，在得到更多的碎裂肽段片段的同时，经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。百泰派克公司应用现有的质谱技术平台，提供出以LC-MS/MS为基础的的肽谱图分析，此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达，检测重组蛋白表达过程是否发生断裂。主要用于蛋白质一级结构的确认，通过使用多种蛋白质酶切反应和液质联用技术对肽段的测序，结合专有的分析软件，能对任何非特异性蛋白酶酶解产物的质谱数据进行分析。从而实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。

质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的流程：

• 首先使用6种蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分别对靶蛋白进行酶切和鉴定
• 接着使用nano LC-MS/MS或者UV LC-MS/MS 对样品进行分析
• 将得到的肽段覆盖率/肽谱图全序列与您提供的理论序列进行比对
• 得到比对结果

质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的优点：

（1）特异性及非特异性蛋白质酶的组合，可实现对任何蛋白质（多肽）的鉴定达到100%的覆盖率。
（2）每个肽段的确认包括：1）基于样品的质量2）基于样品的MS/MS指纹图谱，所以比仅使用一级质谱进行测定更准确。

样品要求：

胶内样品和溶液样品均可以用来进行上述测序
样品纯度越高越好，建议超过80%的蛋白质
需要的靶蛋白样品量：10-20ug
蛋白质胶样品也可用于肽段覆盖率测定，但需对样品进行特殊的前处理。

案例分析：

蛋白样品100%序列验证服务

在实际的实验过程中，按照尽量提高效率和降低花费的原则，我们会首先对客户提供的理论序列进行分析，分析过程是按照几种不同的蛋白酶酶切位点进行肽段覆盖率的预测，假如可以仅仅通过3种蛋白酶酶切就可以100%的覆盖全序列，实际实验过程就会先用这3种蛋白酶进行酶切和后续的序列分析实验，这样可以有效的降低实验的成本。以下是之前项目的部分数据，该项目中客户按照理论序列表达抗体药物，一级序列需要进行验证，以证明表达得到的抗体与理论序列一致，部分实验数据展示如下：

结题报告中，我们会按照下图所示的方式给出肽段覆盖率的详细数据。

中/英文项目报告

在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括： 

1. 实验步骤（中英文）
2. 相关的质谱参数（中英文）
3. 质谱图片 
4. 原始数据
5. 生物药物肽段覆盖率信息

生物药物肽段覆盖率测定一站式服务

您只需下单-寄送样品 
百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

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