蛋白质免疫印迹和电转移服务

电泳分离的蛋白质从凝胶基质转移或“印迹”到膜（通常是硝酸纤维素或PVDF）上，然后在膜表面进行基于抗体的后续检测，称为蛋白质免疫印迹（Western Blot或immunoblotting）。百泰派克生物科技提供蛋白质免疫印迹分析服务，蛋白质免疫印迹法通过高选择性和高敏感的抗体-抗原相互作用，可用于从复杂蛋白质混合物中检测特定的目标蛋白质，例如组织匀浆或细胞提取物等。所得数据可用于对目标蛋白质进行定性和半定量分析。

蛋白免疫印迹是一种广泛使用的蛋白质分析技术，可用于检测组织匀浆或提取物样品中的特定蛋白质。蛋白免疫印迹法使用凝胶电泳法分别通过3-D结构和多肽链的长度对天然蛋白质及变性蛋白质进行分离，分离后的蛋白质被转移到膜（通常是硝酸纤维素膜或PVDF）上，最后在膜上用对目标蛋白质具有特异性的抗体进行进行特异性识别。Western Blot广泛应用于分子生物学、生物化学、免疫遗传学和其他分子生物学领域。

在蛋白免疫印迹分析中，首先利用各种方法，如SDS-PAGE和IEF，通过等电点（pI）、分子量、电荷或这些因素的组合，从凝胶电泳中分离出样品中的蛋白质。常用SDS-PAGE进行分离，因为所有蛋白质都被溶解在凝胶内，沿相同方向迁移，结合SDS的变性作用，抗原表位更容易被识别。

凝胶电泳分析之后，将蛋白质从凝胶转移至由硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯（PVDF）制成的膜上，以用于抗体检测。PVDF膜与蛋白质的结合能力比硝酸纤维素膜更高，但硝酸纤维素膜与较小蛋白质结合的更好。转移蛋白质的主要方法是电印迹，电印迹法使用电流将蛋白质从凝胶中拉入PVDF或硝酸纤维素膜中。电泳转移方法包括：湿法转印、半干转印和半湿转印。如果使用等电点聚焦进行蛋白质分离，那么利用压力转印扩散来转移蛋白质更为有效。

转印过程从一个小时（半干转印）到过夜转印（湿法转印），时间不等。转印完成后，膜的自由结合位点被蛋白质混合物封闭，因此后续抗体检测不会受到干扰。即可对转印到膜上的蛋白质进行抗体检测。包含蛋白质的膜首先与一抗进行孵育，然后再由识别一抗的二抗结合后进行检测。二抗一般带有报告基团，并具有很高的灵敏度。

最灵敏的检测方法是使用增强化学发光（ECL）：通过抗体-辣根结合物对一抗进行识别。使用增强化学发光的特殊变体，可检测低至1 pg的蛋白条带。

蛋白免疫印迹还可用于追踪蛋白质的磷酸化，与磷酸化蛋白质的所有亚型相结合的抗体会在二维凝胶上呈现“念珠状”外观。也可用于鉴定免疫共沉淀产生的复合物中的已知蛋白和未知蛋白，只要目标蛋白质在凝胶中，就可以通过考马斯蓝染色，从凝胶中切出相应的斑点，进行后续质谱鉴定。