HILIC-UHPLC分析N-聚糖键

糖苷键很少对糖蛋白的功能产生影响，因此通常不需要确定。然而，糖蛋白的聚糖结构高度复杂，评估N-糖的糖苷键的构型和位置对分析糖蛋白的结构是有帮助的。已知有五种常见的N-聚糖键，最常见的是N-乙酰氨基葡糖与天冬酰胺（GlcNAcβ1-Asn）连接。与Asn连接的其他类型包括：哺乳动物和古生菌的层粘连蛋白中的葡萄糖，古生菌中的N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），鼠李糖素细菌。也有报告显示，葡萄糖在甜玉米中与精氨酸连接。

N-聚糖通过N-糖苷酶F（Peptide N Glycosidase F，PNGase F*）反应从糖蛋白中水解出来。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）标记，然后用多种外切糖苷酶消化。最后，通过亲水相互作用色谱法（HILIC）结合荧光和质谱检测对聚糖进行分析。

N-聚糖键分析一般步骤

1. 样品制备
2. N聚糖水解
3. 2-AB标记和标记的聚糖与一系列外切糖苷酶顺序反应
4. 基于UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外，可以通过MS/MS片段确定详细的聚糖结构

*内切糖苷酶的作用：
内切糖苷酶能从糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不会从结合的蛋白质和脂质分子中水解寡糖。内切糖苷酶通过破坏聚合物中两个糖单体之间的糖苷键起作用。
内切糖苷酶H：水解低聚甘露糖和杂合N-聚糖
内切糖苷酶F：水解简单的二价N-聚糖

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